新疆野生盘羊ISG15基因的克隆表达

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2013.07.005

畜牧兽医学报 ›› 2013, Vol. 44 ›› Issue (7): 1023-1029.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2013.07.005

新疆野生盘羊ISG15基因的克隆表达

鲁海富¹，沈文¹，刘恺²，崔茹鹏¹，杨文¹，姜方配¹，孙延鸣^1*

（1.石河子大学动物科技学院,石河子 832003； 2.乌鲁木齐市动物园，乌鲁木齐 830094）

收稿日期:2012-10-19 出版日期:2013-07-23 发布日期:2013-07-23
通讯作者: 孙延鸣，博士，教授，主要从事临床兽医学研究，E-mail：sym@shzu.edu.cn
作者简介:鲁海富（1987-），男，安徽合肥人，硕士生，主要从事兽医临床学研究， E-mail：445330418@qq.com
基金资助:
国家自然科学基金（31060351）

Cloning and Expression of the ISG15 Gene of Xinjiang Wild Argali

LU Hai-fu¹, SHEN Wen¹, LIU Kai², CUI Ru-peng¹, YANG Wen¹, JIANG Fang-pei¹, SUN Yan-ming^1*

(1. College of Animal Science and Technology, Shihezi University, Shihezi 832003, China;2. Zoo of Urumqi, Urumqi 830094, China)

Received:2012-10-19 Online:2013-07-23 Published:2013-07-23

摘要/Abstract

摘要：

本研究旨在克隆表达新疆野生盘羊ISG15基因，并对其表达产物的活性进行检测。首先，利用RT-PCR和RACE技术克隆盘羊ISG15基因的cDNA全长序列，再将ISG15基因克隆至真核表达载体pPIC9K，经电击转化至GS115中并用甲醇进行诱导表达，用Ni²⁺螯合亲和层析法对表达的蛋白进行纯化，最后通过淋巴细胞转化试验来检测表达蛋白的活性。结果表明：克隆得到的新疆野生盘羊ISG15基因cDNA全长为642 bp，开放阅读框为474 bp，编码157个氨基酸。经酵母重组菌株GS115/pPIC9K-ISG15表达，SDS-PAGE结果显示表达的蛋白约为33 ku，表达的蛋白可用Ni²⁺螯合亲和层析方法纯化，淋巴细胞增殖试验结果显示，表达的ISG15蛋白能够显著地刺激淋巴细胞增殖（P<0.05），表明表达的蛋白具有生物学活性。

Abstract:

The aim of this study was to clone and express the ISG15 gene of Xinjiang Wild argali, and to detect the activity of the expression product. The full length cDNA of Xinjiang Wild argali ISG15 gene was cloned by RT-PCR and RACE, then ISG15 gene was cloned into eukaryotic expression vector pPIC9K, the pPIC9K- ISG15 was transformed into Pichia Pastoris GS115 yeast genome by electroporation and the expression was induced by methanol,the expressed protein was purified by Ni²⁺chelate affinity chromatography, finally the activity of the expressed protein was detected by lymphocyte transformation test. The result showed that the full length cDNA of Xinjiang Wild argali ISG15 was 642 bp,the open reading frame was 474 bp, encoded 157 amino acids. The yeast recombinant strains GS115/pPIC9K-ISG15 was used to express ISG15, SDS-PAGE analysis showed the expressed protein was 33 ku, the expressed protein could be purified by Ni²⁺chelate affinity chromatography. The lymphocyte proliferation test results showed that the expressed product could significantly stimulate lymphocyte proliferation(P<0.05), which proved the expressed protein had biological activity.

中图分类号:

S826
S813.3

鲁海富，沈文，刘恺，崔茹鹏，杨文，姜方配，孙延鸣. 新疆野生盘羊ISG15基因的克隆表达[J]. 畜牧兽医学报, 2013, 44(7): 1023-1029.

LU Hai-fu, SHEN Wen, LIU Kai, CUI Ru-peng, YANG Wen, JIANG Fang-pei, SUN Yan-ming. Cloning and Expression of the ISG15 Gene of Xinjiang Wild Argali[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2013, 44(7): 1023-1029.

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